CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增

[目的]探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法.[方法]收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg.将实验分为3组,第1组在CD4+CD25+Treg中加入100 nmol/L rapamyein (1μg/mL)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周,第8天开始加入1 000 U/mL的IL-2,第2组培养条件除不加rapamycin外其余与第1组相同,第3组培养细胞为CD4+CD25-T细胞,培养条件同第1组.培养第7、14、21天收集细胞计数,第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达.MTr法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD40+T细胞增殖的抑制作用.[结果]三组细胞均有明显的扩增.加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低,但细胞的纯度明显增加.CD4+CD25-T细胞组在培养第1周扩增迅速,从第2周开始增殖减慢,其中CD4+CD25+Treg细胞的比例较培养前无明显的差别.三组至第3周时扩增倍数分别为89±21、338±78、216±55(F=484.655.P<0.0001).细胞的纯度分别为84.32%±4.62%、34.04%±5.78%、0.68%±0.39%(F=24.660,P<0.0001).体外抑制实验显示体外扩增的CD4+C在CD25+T细胞对自体和异体的CD40+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低.在CD4+T/Treg比例为8:1、4:1、2:1、1:1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%,对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%.而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之开间均尤明显的差异.[结论]我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg,其扩增的倍数为89.4 ±20.53,具有免疫抑制功能,有望进一步应用于临床.