体外快速获得核酶P中M1RNA基因的研究
Chin J Clinicians(Electronic Edition)（2020）
摘要
目的 在体外转录快速获得原核生物来源核酶P的核心催化亚基M1RNA.方法以大肠埃希菌DH5α菌液为模板,应用聚合酶链式反应的方法扩增M1RNA基因,并将该基因置于T7启动子下游,其聚合酶链式反应产物经电泳及测序鉴定.以M1RNA基因为模板,以32P标记,在T7 RNA聚合酶的作用下体外转录M1RNA.将产物以尿素变性聚丙烯酰胺凝胶分离并观察结果.结果应用聚合酶链式反应的方法从大肠埃希菌基因组扩增M1RNA基因,经凝胶电泳观察及测序鉴定,证实成功在体外扩增M1RNA基因,并置于T7启动子下游.在T7 RNA聚合酶的催化下,应用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离产物,结果显示377nt处可见与预期相符的条带,证实成功在体外获得M1RNA.结论成功在体外快速获得具有独立催化功能的M1RNA,基于此的基因沉默技术具有发展成新型反义核酸药物的良好前景.
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