流感病毒NS1蛋白与宿主蛋白DOK6的相互作用研究

A型流感病毒非结构蛋白1(NS1)是病毒编码的必需蛋白,在病毒复制周期中发挥重要作用.NS1蛋白在病毒侵入宿主后大量表达,抑制宿主干扰素通路的激活,选择性关闭宿主基因的表达且能够增强病毒蛋白的表达.为研究宿主DOK6蛋白与NS1蛋白的相互作用关系,本研究利用重组质粒pCAGGS-V5-DOK6、pCAGGS-Flag-NS1共转染293T细胞,利用免疫共沉淀试验(Co-IP)检测,结果显示沉淀NS1蛋白后能够检测到DOK6蛋白条带,表明DOK6蛋白与NS1蛋白存在相互作用;将二者共转染A549细胞后利用激光共聚焦显微镜观察,发现二者在细胞质中存在共定位,表明两种蛋白在细胞质中发生相互作用.通过双分子荧光互补试验(BiFC)检测,结果显示NS1蛋白能够与DOK6蛋白的磷酸化酪氨酸结合结构域(Phosphotyrosinebindingdomain,PTB)结合从而发出较强荧光,表明NS1蛋白能够与DOK6蛋白(PTB)结构域发生相互作用.本研究进一步完善了A型流感病毒NS1蛋白参与的复杂分子间相互作用网络,为深入理解流感病毒在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础.