牛病毒性腹泻病毒LAMP-LFD检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种用于牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的特异、灵敏、快速、简便的检测方法.试验利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification LAMP)与横向流动层析试纸(lateral flow dipstick,LFD)相结合的技术,根据BVDV 5'UTR序列保守区段设计4条LAMP特异性引物和1条异硫氰酸荧光素标记的DNA探针,再利用LFD检测扩增产物.通过对反应温度、反应时间、内外引物浓度比、Bst DNA 2.0聚合酶浓度、dNTP Mix浓度、Mg2+浓度等优化后对该方法的特异性及检测灵敏度进行分析并对52份临床样本进行检测,建立了检测BVDV的LAMP-LFD方法.结果显示:LAMP-LFD可特异性检测BVDV,而口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛疱疹病毒1型等均未检出.LAMP-LFD的敏感性较高,对pUC57-5'UTR质粒最低检测浓度为1.9×101拷贝·μL-1.LAMP-LFD与PCR两种检测方法均检测出5份阳性,符合率为100％.本试验成功建立了用于BVDV快速检测的LAMP-LFD方法,该检测方法检测时间短,特异性强,操作简单,灵敏性高,可作为一种新型检测方法应用于基层检测.